גן עמידות לקרבפנם (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
שם מוצר
HWTS-OT045 Carbapenem Resistance Gene (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) ערכת איתור (PCR Fluorescence)
אֶפִּידֶמִיוֹלוֹגִיָה
אנטיביוטיקה של קרבפנם היא אנטיביוטיקה לא טיפוסית β-lactam עם הספקטרום האנטיבקטריאלי הרחב ביותר ופעילות אנטיבקטריאלית חזקה ביותר.בגלל יציבותה ל-β-lactamase והרעילות הנמוכה, היא הפכה לאחת התרופות האנטיבקטריאליות החשובות ביותר לטיפול בזיהומים חיידקיים קשים.קרבפנמים יציבים מאוד בפני פלסמידים מתווכי ספקטרום β-lactamases (ESBLs), כרומוזומים וצפלוספורינאזות בתיווך פלסמיד (אנזימים AmpC).
עָרוּץ
| PCR-Mix 1 | PCR-Mix 2 | |
| FAM | שֵׁד | מֶרֶץ |
| VIC/HEX | שליטה פנימית | שליטה פנימית |
| CY5 | NDM | KPC |
| ROX | OXA48
| OXA23 |
פרמטרים טכניים
| אִחסוּן | ≤-18℃ |
| חיי מדף | 12 חודשים |
| סוג דגימה | כיח, מושבות טהורות, ספוגית פי הטבעת |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5.0% |
| LoD | 103CFU/mL |
| ספֵּצִיפִיוּת | א) הערכה מזהה את ההפניות השליליות הסטנדרטיות של החברה, והתוצאות עומדות בדרישות ההפניות המתאימות. ב) תוצאות בדיקת התגובתיות הצולבת מראות כי לערכה זו אין תגובה צולבת עם פתוגנים נשימתיים אחרים, כגון Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella Hamooxyein, Acinetobacter baumannii, junii, Acinetobacter hemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, adenovirus respiratory, Enterococcus, או דגימות המכילות גנים עמידים אחרים לתרופות CTX, mecA, SHV, SHV, וכו'. ג) נגד הפרעות: מוצין, מינוצילין, גנטמיצין, קלינדמיצין, אימיפנם, צפופרזון, מרופנם, ציפרופלוקסצין הידרוכלוריד, לבופלוקסצין, חומצה קלבולנית, רוקסיתרומיצין נבחרים לבדיקת הפרעות, והתוצאות מראות שלחומרים המפריעים הנ"ל אין הפרעות. לאיתור הגנים העמידות לקרבפנם KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM ו-IMP. |
| מכשירים ישימים | Applied Biosystems 7500 מערכות PCR בזמן אמת QuantStudio®5 מערכות PCR בזמן אמת SLAN-96P בזמן אמת PCR Systems (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) מערכת LightCycler®480 בזמן אמת PCR מערכת זיהוי PCR בזמן אמת LineGene 9600 Plus (FQD-96A,האנגג'ואוBioer technology) MA-6000 מחזור תרמי כמותי בזמן אמת (Suzhou Molarray Co., Ltd.) מערכת BioRad CFX96 בזמן אמת PCR מערכת BioRad CFX Opus 96 בזמן אמת PCR |
זרימת עבודה
אופציה 1.
ריאגנט מיצוי מומלץ: ערכת DNA/RNA כללי מאקרו ומיקרו-בדיקה (HWTS-3019-50, HWTS-3019-32, HWTS-3019-48, HWTS-3019-96) (שניתן להשתמש בו עם חולץ חומצות גרעין אוטומטיות מאקרו ומיקרו-בדיקה (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) מאת Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd.. הוסף 200μL של תמיסת מלח רגילה משקע התלוס.השלבים הבאים צריכים לעקוב אחר הוראות המיצוי, ונפח החלוקה המומלץ הוא100μL.
אפשרות 2.
מגיב מיצוי מומלץ: ריאגנט מיצוי או טיהור של חומצת גרעין (YDP302) מאת Tiangen Biotech (Beijing) Co., Ltd. יש להתחיל את המיצוי בהתאם לשלב 2 של הוראות השימוש (הוסף 200μL של חיץ GA למשקע התלוס , ומנערים עד שהתאלוס מושעה לחלוטין).השתמש במים נטולי RNase/DNase עבור elution, ונפח elution ecommended הוא 100μL.
אפשרות 3.
ריאגנט מיצוי מומלץ: מגיב לשחרור מדגם מאקרו ומיקרו-בדיקה.יש לשטוף את דגימת הליחה על ידי הוספת 1 מ"ל של תמיסת מלח רגילה למשקע התלוס המטופל שהוזכר לעיל, לצנטריפוגה במהירות של 13000 r/min למשך 5 דקות, והסופרנטנט מושלך (שמור 10-20 µL של סופרנטנט).עבור ספוגית מושבה טהורה ופי הטבעת, הוסף 50μL מגיב לשחרור דגימה ישירות למשקע התאלוס המטופל שהוזכר לעיל, ויש לחלץ את השלבים הבאים בהתאם להוראות השימוש.
