גן עמידות לקרבפנם (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP)
שם המוצר
ערכת גילוי HWTS-OT045 לגן עמידות לקרבפנם (KPC/NDM/OXA 48/OXA 23/VIM/IMP) (PCR פלואורסצנטי)
אֶפִּידֶמִיוֹלוֹגִיָה
אנטיביוטיקה מסוג קרבפנם היא אנטיביוטיקה אטיפית מסוג β-לקטם בעלת הספקטרום האנטיבקטריאלי הרחב ביותר ופעילות אנטיבקטריאלית חזקה ביותר. בשל יציבותה ל-β-לקטמאז ורעילותה הנמוכה, היא הפכה לאחת התרופות האנטיבקטריאליות החשובות ביותר לטיפול בזיהומים חיידקיים חמורים. קרבפנמים יציבים מאוד ל-β-לקטמאזות בעלות ספקטרום מורחב (ESBLs) בתיווך פלסמידים, כרומוזומים וצפלוספורינאזות (אנזימים AmpC) בתיווך פלסמידים.
עָרוּץ
| PCR-Mix 1 | PCR-Mix 2 | |
| משפחה | שֵׁד | מֶרֶץ |
| VIC/HEX | בקרה פנימית | בקרה פנימית |
| CY5 | NDM | KPC |
| רוקס | OXA48
| OXA23 |
פרמטרים טכניים
| אִחסוּן | ≤-18℃ |
| חיי מדף | 12 חודשים |
| סוג הדגימה | כיח, מושבות טהורות, משטח רקטלי |
| Ct | ≤36 |
| CV | ≤5.0% |
| חוק הביטחון | 103CFU/מ"ל |
| ספֵּצִיפִיוּת | א) הערכה מזהה את ההפניות השליליות הסטנדרטיות של החברה, והתוצאות עומדות בדרישות ההפניות המתאימות. ב) תוצאות בדיקת התגובה הצולבת מראות כי לערכה זו אין תגובה צולבת עם פתוגנים נשימתיים אחרים, כגון Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Klebsiella oxytoca, Haemophilus influenzae, Acinetobacter junii, Acinetobacter haemolyticus, Legionella pneumophila, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Candida albicans, Chlamydia pneumoniae, Respiratory adenovirus, Enterococcus, או דגימות המכילות גנים עמידים אחרים לתרופות CTX, mecA, SME, SHV, TEM וכו'. ג) נוגד התערבות: נבחרו לבדיקת ההפרעה חומרים כמו מיוצין, מינוציקלין, גנטמיצין, קלינדמיצין, אימיפנם, צפופרזון, מרופנם, ציפרופלוקסצין הידרוכלוריד, לבופלוקססין, חומצה קלוולנית ורוקסיתרומיצין, והתוצאות מראות כי לחומרים המפריעים שהוזכרו לעיל אין תגובה מפריעה לגילוי גנים של עמידות לקרבפנם KPC, NDM, OXA48, OXA23, VIM ו-IMP. |
| מכשירים רלוונטיים | מערכות PCR בזמן אמת של Applied Biosystems 7500 מערכות PCR בזמן אמת של QuantStudio®5 מערכות PCR בזמן אמת SLAN-96P (Hongshi Medical Technology Co., Ltd.) מערכת LightCycler®480 PCR בזמן אמת מערכת גילוי PCR בזמן אמת LineGene 9600 Plus (FQD-96A，האנגג'ואוטכנולוגיית ביו-ר) מחזור תרמי כמותי בזמן אמת MA-6000 (סוז'ו מולאריי בע"מ) מערכת PCR בזמן אמת BioRad CFX96 מערכת PCR בזמן אמת BioRad CFX Opus 96 |
זרימת עבודה
אפשרות 1.
ריאגנט מיצוי מומלץ: ערכת DNA/RNA כללית לבדיקת מאקרו ומיקרו (HWTS-301)950-, HWTS-3019-32, HWTS-301948-, HWTS-3019-96) (אשר ניתן לשימוש עם Macro & Micro-Test Automatic Nucleic Acid Extractor (HWTS-3006C, HWTS-3006B)) מתוצרת Jiangsu Macro & Micro-Test Med-Tech Co., Ltd.. הוסיפו 200 מיקרוליטר של תמיסת מלח רגילה למשקע התאלוס. השלבים הבאים צריכים להיות בהתאם להוראות החילוץ, ונפח האלציה המומלץ הוא100 מיקרוליטר.
אפשרות 2.
ריאגנט מומלץ לחילוץ: ריאגנט לחילוץ או טיהור חומצות גרעין (YDP302) של Tiangen Biotech (Beijing) Co., Ltd. יש להתחיל את החילוץ בהתאם לשלב 2 בהוראות השימוש (הוסיפו 200 מיקרוליטר של בופר GA למשקע התאלוס, ונערו עד שהתאלוס מרחף לחלוטין). השתמשו במים נטולי RNase/DNase לצורך שחרור, ונפח השחרור המומלץ הוא 100 מיקרוליטר.
אפשרות 3.
ריאגנט מומלץ לחילוץ: ריאגנט לשחרור דגימות Macro & Micro-Test. יש לשטוף את דגימת הכיח על ידי הוספת 1 מ"ל של תמיסת מלח רגילה למשקע התאלוס המטופל שהוזכר לעיל, לצנטריפוגה במהירות של 13000 סל"ד למשך 5 דקות, ולהשליך את הנוזל העליון (לשמור 10-20 מיקרוליטר של נוזל עליונה). עבור מושבה טהורה ומקלון רקטלי, יש להוסיף 50 מיקרוליטר של ריאגנט שחרור דגימה ישירות למשקע התאלוס המטופל שהוזכר לעיל, ויש לבצע את השלבים הבאים בהתאם להוראות השימוש.
